名称

　　小鼠造模及检测服务

　　类型

　　技术服务

　　数量

　　1.00

　　预算（元）

　　35000

　　相关要求

　　一、服务内容

　　小鼠急性蓝光暴露视网膜损伤模型建立及检测服务。

　　二、实验动物

　　1. 动物品系：C57BL/6J 小鼠

　　2. 动物级别：SPF 级

　　3. 性别：雄性

　　4. 周龄：8～10 周龄

　　5. 体重：20～25 g

　　6. 动物总数：32 只

　　7. 急性反应指标板块：16 只

　　8. 结构损伤观察板块：16 只

　　9. 每个板块分组：对照组、5 000 lux 组、10 000 lux 组、15 000 lux 组

　　10. 符合纳入条件：一般状态良好，摄食饮水正常；暴露前眼部检查无明显异常；暴露前 OCT 无视网膜结构异常

　　三、蓝光暴露

　　1. 设备类型：动物蓝光暴露系统

　　2. 暗适应时间：暴露前 12 h 暗适应

　　3. 暴露笼位：随机分组，每笼 1 只小鼠

　　4. 笼位摆放：4 个笼位随机摆放

　　5. 对照组：相同饲养条件，不接受蓝光暴露

　　6. 低剂量组：5 000 lux，连续蓝光照射 12 h

　　7. 中剂量组：10 000 lux，连续蓝光照射 12 h

　　8. 高剂量组：15 000 lux，连续蓝光照射 12 h

　　9. 暴露限制：暴露期间不得放置明显遮光的躲避屋或高反射物。

　　10. 饮水饲料：暴露期间各组供给方式保持一致。

　　11. 暴露记录：开始时间、结束时间、实测照度、温湿度、动物状态。

　　12. 光照强度说明：5 000 lux、10 000 lux、15 000 lux 为暂定剂量，调整须经采购方确认。

　　四、急性反应指标板块

　　1. 动物数：16 只，每组动物数4 只，造模动物数12 只。

　　2. 组别：对照组、5 000 lux 组、10 000 lux 组、15 000 lux 组。

　　3. 取样：蓝光暴露结束后立即取样，对照组同期取样；处死后快速剥离视网膜组织并保存。

　　4. 检测指标：匀浆后离心取上清，检测MDA、SOD、GSH-Px。

　　5. 参考试剂盒：Solarbio MDA 试剂盒 BC6415，Solarbio SOD 试剂盒 BC5165，Solarbio GSH-Px 试剂盒 BC1195，或同等及以上质量试剂盒。

　　五、结构损伤观察板块

　　1. 动物数：16 只，每组动物数4 只，造模动物数12 只。

　　2. 组别：对照组、5 000 lux 组、10 000 lux 组、15 000 lux 组。

　　3. OCT 时间点：D0 暴露前、D7

　　4. OCT 记录指标：OCT 原始图像、视网膜总厚度、ONL 厚度、外层视网膜厚度、D0-D7 减薄量

　　5. 一般观察记录：活动、饮食、体重、异常情况

　　6. D7 取材记录：动物编号、眼别、取材时间、固定方式、是否与 OCT 编号一致

　　六、HE 染色及分析参数

　　1. 切面要求：选取通过视神经盘或邻近视神经盘的后极部切面。

　　2. 测量位置：视神经盘两侧固定距离处。

　　3. 测量区域：尽量与 OCT 距视盘固定距离区域相对应。

　　4. 每眼测量点：每侧 3 个测量点，双侧合计 6 个测量点。

　　5. 单眼结果：6 个测量点取平均值。

　　6. 单只小鼠结果：双眼切片均合格时取双眼平均值；一侧切片不合格时采用另一侧结果。

　　7. 统计单位：单只小鼠。

　　8. HE 定性指标：视网膜总层次是否清晰完整，ONL 是否变薄，IS/OS 是否排列紊乱或断裂，是否存在视网膜水肿或空泡样变，RPE 层是否连续或紊乱，是否存在局灶性结构塌陷。

　　9. HE 定量指标：视网膜总厚度、ONL 厚度、ONL 细胞层数、外层视网膜厚度即 ONL + IS/OS 厚度。

　　10. HE 原图要求：带比例尺，按动物编号、组别、眼别、切片编号命名。

　　11. HE 标注图要求：标注 GCL、INL、ONL、IS/OS、RPE；损伤图可标注 ONL thinning、photoreceptor loss、IS/OS disruption、RPE damage。

　　七、成果交付

　　1. 完整实验报告

　　2. 动物分组表、动物编号表、随机分组记录、饲养观察记录

　　3. 蓝光设备预检测记录、照度记录、温湿度记录、暴露记录

　　4. 取材记录、样本编号表

　　5. MDA、SOD、GSH-Px 原始检测数据；按蛋白浓度校正后的 MDA、SOD、GSH-Px 数据。

　　6. OCT 原始图像、OCT 厚度测量数据、D0-D7 视网膜厚度减薄量数据。

　　7. HE 原始图像、 HE 形态学标注图、 HE 测量点原始数据、HE 定性结果、 HE 定量结果、 组间汇总表，采用均数±标准差表示。

　　8. 统计图：ONL 厚度柱状图、ONL 核层行数柱状图、视网膜总厚度柱状图、外层视网膜厚度柱状图。

　　9. HE 测量点原始数据字段：动物编号、组别、眼别、切片编号、测量点、视网膜总厚度、ONL 厚度、ONL 核层行数、外层视网膜厚度、图像质量、排除原因。

　　10. 样本保存和邮寄：按采购方要求执行。

　　八、供应商要求

　　1. 具备 SPF 级小鼠饲养、动物实验、蓝光暴露造模、眼科 OCT 检查、视网膜组织取材、组织病理 HE 染色、氧化应激指标检测和数据分析能力。

　　2. 具备合规的实验动物使用、饲养或委托合作条件。

　　3. 能够提供动物来源证明、动物质量合格证明、伦理审批。

　　4. 遵守实验动物福利、生物安全和实验室管理要求。

　　5. 具备动物蓝光暴露设备、照度检测设备、温湿度监测设备、小动物眼科 OCT 设备、组织取材和固定条件、HE 染色、酶标仪或相应生化检测平台。

　　6. 技术人员应熟悉小鼠视网膜蓝光损伤模型、眼部组织取材、OCT 图像采集与分析、HE 切片制备与定量分析。

　　7. 能够保证动物编号、样本编号、图像编号和检测数据全流程可追溯。

　　8. 不得擅自调整动物品系、性别、周龄、体重范围、组别、样本量、光照强度、暴露时长、暗适应时间、取样时间点、检测指标或数据统计单位；确需调整时，须经采购方确认。

　　9. 出现动物死亡、严重应激、样本损坏、图像不合格、切片不合格或检测异常时，须及时报告并说明原因。

　　10. 验收依据：实验流程完成，样本量符合要求，原始记录完整，检测数据齐全，图像质量满足测量要求，报告内容完整且可追溯。